第五章 土壤全氮的测定（凯氏蒸馏法）
5。1 方法提要 样品在加速剂的参与下，用浓硫酸消煮时，各种含氮有机化合物，经过复杂的高温分解反应，转化为铵态氮。碱化后蒸馏出来的氨用硼酸吸收，以酸标准溶液滴定，计算土壤全氮含量（不包括硝态氮）。
包括硝态和亚硝态氮的全氮测定，在样品消煮前，需先用高锰酸钾将样品中的亚硝态氮氧化为硝态氮后，再用还原铁粉使全部硝态氮还原，转化成铵态氮。
5。2 适用范围 本方法适用于各类土壤全氮含量的测定。
5。
3 主要仪器设备
5。3。1 消化管（与消煮炉、定氮仪配套），容积250mL。
5。3。2 定氮仪。
5。3。3 可控温铝锭消煮炉（升温不低于400℃）。
5。
3。4 半微量滴定管，10mL。
5。3。5 分析天平（精确到0。0001g）。
5。4 试剂
5。4。1 硫酸 [ρ（H2SO4）=1。84g•mL-1]；
5。
4。2 硫酸标准溶液 [c（1/2H2SO4）=0。01mol•L-1]或盐酸标准溶液[c（HCl）=0。01mol•L-1]：配制及标定参见附录1。
5。4。3 氢氧化钠溶液 [ρ（NaOH）=400g•L-1 ]：称取400g氢氧化钠溶于水中，稀释至1L。
5。4。4 硼酸—指示剂混合液。
硼酸溶液 [ρ（H3BO3）=20g•L-1]：称取硼酸20。00g溶于水中，稀释至1L。
混合指示剂：称取0。5g溴甲酚绿和0。1g甲基红于专用玻璃研钵中，加入少量95%乙醇，研磨至指示剂全部溶解后，加95%乙醇至100mL。
使用前，每升硼酸溶液中加5mL混合指示剂，并用稀酸或稀碱调节至红紫色（PH约4。5）。此液放置时间不宜过长，如在使用过程中PH有变化，需随时用稀酸或稀碱调节。
5。4。5 加速剂：称取100g硫酸钾，10g硫酸铜（CuSO4•5H2O）,1g硒粉于研钵中研细，必须充分混合均匀。
5。4。6 高锰酸钾溶液[ρ（KMnO4）=50g•L-1 ]：称取25g高锰酸钾溶于500mL水，贮于棕色
瓶中。
5。4。7 硫酸溶液（1：1）。
5。
4。8 还原铁粉：磨细通过0。149mm孔径筛。
5。4。9 辛醇。
5。5 分析步骤
5。5。1 称样：称取通过0。25mm（60号筛）孔径筛的风干试样0。3g（含氮约1mg，精确到0。
0001g）。
5。5。2 土样消煮：①不包括硝态和亚硝态氮的消煮：将试样送入干燥的消化管底部，加入2。0加速剂，加水约2mL湿润试样，再加8mL浓硫酸，摇匀。将消化管置于控温消煮炉上，用小火加热，约200℃，待管内反应缓和时（约10~15min），加强火力至375℃。
待消煮液和土粒全部变为灰白稍带绿色后，再继续消煮1h，冷却，待蒸馏。在消煮试样的同时，做两份空的试验，空白试验除不加土壤外，其他操作和试样一样。
②包括硝态氮和亚硝态氮的消煮：将试样送入干燥的消化管底部，加1mL高锰酸钾溶液，轻轻摇动消化管，缓缓加入2mL 1：1硫酸溶液，不断转动消化管，放置5 min后，再加入1滴辛醇。
通过长颈漏斗0。5g (±0。01g) 还原铁粉送入消化管底部，瓶口盖上弯颈漏斗，转动消化管，使铁粉与酸接触，待剧烈反应停止时（约5min），将消化管置于控温消煮炉上缓缓加热45 min（管内土液应保持微沸，以不引起大量水分丢失为宜）。停止加热，待消化管冷却后，加2。
0g加速剂和8 mL浓硫酸，摇匀。按“不包括硝态和亚硝态氮的消煮”的步骤，消煮至试液完全变成黄绿色，再继续消煮1 h，冷却，蒸馏。在消煮试样的同时，做两份空白试验。
5。5。3 氨的蒸馏和滴定：蒸馏前先按仪器使用说明书检查定氮仪，并空蒸0。
5 h洗净管道。待消煮液冷却后，向消化管内加入约60 mL水和35 mL 400 g•L-1氢氧化钠溶液，摇匀，置于定氮仪上。于三角瓶中加入25 mL 20 g•L-1 硼酸—指示剂混合液，将三角瓶置于定氮仪冷凝器的承接管下，管口插入硼酸溶液中，以免吸收不完全。
蒸馏5 min，用少量的水洗涤冷凝管的末端，洗液收入三角瓶内。每测完1个样后用空试管装清水清洗约2min。
用0。01 mol•L-1硫酸（或0。01 mol•L-1盐酸）标准溶液滴定馏出液，由蓝绿色至刚变为红紫色。记录所用酸标准溶液的体积。
空白测定所用酸标准溶液的体积，一般不得超过0。4 mL。
5。6 结果计算
土壤全氮（N），g •kg-1 = [c•(V-V0) ×0。014/m] ×1000
V0——滴定空白时所用酸标准溶液的体积，mL；
c——酸标准溶液的浓度，mol•L-1；
0．014——氮原子的毫摩尔质量；
m——风干试样质量，g；
1000——换算成每千克含量。
平行测定结果用算术均值表示，保留小数点后两位。
5。7 精密度 平行测定结果允许相差：
土壤含氮量（g •kg-1） 允许绝对相差（g •kg-1）
>1 ≤0。
05
1~0。6 ≤0。04
<0。6 ≤0。03
5。8 注释
①因试样烘干过程中可能使全氮量发生变化，因此土壤全氮用风干样品测定。
如果需要提供烘干基含量，可测定土壤水分进行折算。折算公式为：
土壤全氮（烘干基），g •kg-1 =土壤全氮（风干基），g •kg-1×100/[100-ω（H2O）]
式中：ω（H2O）——风干土水分含量，%。
②试样的粒径，这里采用0。25mm孔径筛，但如果含氮量高，称量<0。5g时，则应通过0。149mm孔径筛。
③一般土壤中硝态氮含量不超过全氮含量的1%，故可忽然不计。如硝态氮含量高，则要用高锰酸钾和铁粉预处理，硝态氮的回收率在90%以上。
④某些还原铁粉会有大量氮，在试剂选择上应注意。
⑤消煮的温度应控制在360~400℃范围内，此时，消煮的土液保持微沸，硫酸蒸汽在消化管上部1/3处冷凝流回。超过400℃土液将剧烈沸腾，硫酸蒸汽达到消化管顶部甚至溢出，将引起硫酸铵的热分解而导致氮素损失。
⑥蒸馏时间一般为5 min，但由于仪器型号及蒸馏电流设置不同，应首先作试验确定，即用纳氏试剂逐分钟检查蒸馏液中是否含有铵。
第六章 碱解氮的测定（碱解扩散法）
6。1 方法原理 在扩散皿中，用1。
0mol/LNaOH水解土壤，使易水解态氮(潜在有效氮)碱解转化为NH3，NH3 扩散后为H3BO3 所吸收。H3BO3 吸收液中的NH3 再用标准酸滴定，由此计算土壤中碱解氮的含量。
6。2 主要仪器
扩散皿、半微量滴定管、恒温箱。
6。3 试剂
6。3。1 1。0mol/LNaOH 溶液。称取NaOH （化学纯）40。OGg溶于水,冷却后稀释至1L。
6。3。2 20 g••L-1 H3BO3---指示剂溶液。
同5。4。4。
6。3。3 0．005mo 1/L（1/2H2SO4）标准溶液。量取H2SO4（化学纯）2。83mL,加蒸馏水稀释至5000mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为0。0200mo1/L(1/2H2SO4)标准溶液,再将此标准液准确地稀释4倍，即得0。
0050mo1/L(1/2H2SO4)标准液(注1)。
6。3。4 碱性胶液。取阿拉伯胶40。0g 和水50mL在烧杯中热温至70—80 ℃ 搅拌促溶,约1h后放冷。加入甘油20mL和饱和K2CO3水溶液20mL，搅拌、放冷。
离心除去泡沫和不溶物，清液贮于具塞玻瓶中备用。
6。3。5 FeSO4•7H2O粉末。将FeSO4•7H2O（化学纯）磨细，装入密闭瓶中，存于阴凉处。
6。3。6 Ag2SO4饱和溶液。存于避光处。
6。4 操作步骤（注2）
称取通过18号筛（1mm）风干土样2。00g，置于洁净的扩散皿外室，轻轻旋转扩散皿，使土样均匀地铺平。
取H3BO3—指示剂溶液2mL放于扩散皿内室，然后在扩散皿外室边缘涂碱性胶液，盖上毛玻璃（注3），旋转数次，使皿边与毛玻璃完全黏合。
再渐渐转开毛玻璃一边，使扩散皿外室露出一条狭缝，迅速加入1 mol/L NaOH溶液10。0mL，立即盖严，轻轻旋转扩散皿，让碱溶液盖住所有土壤。再用橡皮筋圈紧，使毛玻璃固定。随后小心平放在40±1℃恒温箱中，碱解扩散24±0。5h后取出（可以观察到内室应为蓝色）内室吸收液中的NH3用0。
005或0。01mol/L(1/2H2SO4)标准液滴定(注4)。
在样品测定的同时进行空白试验，校正试剂和滴定误差。
6。5 结果计算
碱解氮（N）含量（mg/kg）=[ c(V－VO)×14。
0] ×10³/m
式中：C¬¬——0。005mol/L （1/2H2SO4)标准溶液的浓度（mol•L－1)；
V——样品滴定时用去0。005mol•L－1（1/2H2SO4)标准液体积（mL）；
V0——空白试验滴定时用去0。
005mol••L－1（1/2H2SO4)标准液体积（mL）；
14．0——氮原子的摩尔质量（g/mol-l)；M—样品质量（g）；
10³——换算系数。
两次平行测定结果允许绝对相差为5mg•kg－1。
6。6 注释
注1：如要配非常准确的0。005mol•L－1/2H2SO4 标准液，则可以吸取—定量的NH4＋－N标准溶液，在样品测定的同时，用相同条件的扩散法标定。例如，吸取5。00mg•kg-1NH4＋－N标准溶液(含NH4＋—N 0。
250mg)放入扩散皿外室,碱化后扩散释放的NH3经H3BO3吸收后，如滴定用去配好的稀标准H2SO4 液3。51mL,则标准H2SO4的农度为:
c(1/2H2SO4) = [0。00025/(3。51×0。014)]= 0。
00508mol/L
注2：如果要将土壤中NO3-—N 包括在内,测定时需加FeSO4。7H2 O粉，并以Ag2SO4为催化剂，使NO3-—N还原为NH3。而FeSO4 本身要消耗部分NaOH，所以测定时所用NaOH溶液的浓度须提高。
例如2g土加1。07mol•L-1 NaOH 10mL 、FeSO4。7H2O 0。2g 和饱和Ag2SO4溶液0。1mL进行碱解还原。
注3：由于胶液的碱性很强，在涂胶液和洗涤扩散时，必须特别细心，慎防污染内室，造成错误。
注4：滴定时要用小玻璃棒小心搅动吸收液，切不可摇动扩散皿。
第七章 M3法土壤有效磷、速效钾的测定
7。1 方法原理 M3浸提剂中的0。2mol/L HOAc—0。
25 mol/L NH4NO3形成了pH2。5的强缓冲体系，并可浸提出交换性K、Ca、Mg、Fe、Mn、Cu、Zn等阳离子；0。015 mol/L NH4F—0。013 mol/L HNO3可调控P从Ca、Al、Fe无机磷源中的解吸；0。001mol/L EDTA可浸出螯合态Cu、Zn、Mn 、Fe等，因此，M3浸提剂可同时提取土壤中有效的磷、钾、钙、镁、铁、锰、铜、锌、硼等多种营养元素。
7。2 试剂与仪器
7。2。1 试剂
7。2。1。1 硝酸铵
7。2。1。2 氟化铵
7。2。1。3 冰乙酸
7。
2。1。4 硝酸
7。2。1。5 乙二胺四乙酸
7。2。1。6 酒石酸锑钾
7。2。1。7 钼酸铵
7。2。1。8 硫酸
7。2。1。
9 抗坏血酸
7。2。1。10 磷酸二氢钾
7。2。1。11 M3贮备液[c（NH4F）=3。75 mol/L c（EDTA）=0。25 mol/L]：称取氟化铵（分析纯）138。9g溶于约600mL去离子水中，摇动，再加入乙二胺四乙酸（EDTA）73。
1g，溶解后用去超纯水定容至1000mL，充分混匀后贮存于塑料瓶中（在冰箱内可长期使用），可供5000个样次使用，如工作量不大，可按比例减少贮备液数量。
7。2。1。12 M3浸提剂：用1000mL或2000mL量筒量取2000mL去离子水，加入5000mL塑料桶中，称取硝酸铵100。
0g，使之溶解，加入20。0mL M3贮备液，再加入冰乙酸（即17。4 mol/L）57。5 mL和浓HNO3 （HNO3，68%~70%，分析纯）4。1mL，用量筒加水稀释至5000mL，充分混合均匀，此液pH应为2。5±0。1（贮存于塑料瓶中备用，可供100个样次使用）。
7。2。1。13 钼锑抗试剂：称取酒石酸锑钾[K（SbO）C4H4O6•1/2H2O，分析纯]0。5g溶于100mL
去离子水，配制成0。5%的溶液。另称取钼酸铵[（NH4）6 Mo7O24•4H2O，分析纯]10。
0g溶于450mL水中，慢慢地加入153 mL浓H2SO4（分析纯），边加边搅动。再将100mL 0。5%酒石酸锑钾溶液加入钼酸铵溶液中，最后加水至1000mL，充分摇匀，贮存于棕色瓶中，此为钼锑贮备液。
临用前（当天）称取抗坏血酸（即维生素C，分析纯）1。
5g溶于100mL钼锑贮备液中，混匀，此为钼锑抗试剂，有效期24h，如保存于冰箱中则有效期较长。上述试剂中H2SO4的浓度为5。5 mol/L（1/2 H2SO4），钼酸铵为1%，酒石酸锑钾为0。05%，抗坏血酸为1。5%。
7。
2。1。14 磷工作溶液[（P）＝5mg/L]：称取105℃烘干2h的磷酸二氢钾（KH2PO4，分析纯）0。2195g，置于400mL去离子水中，加入浓H2SO45mL（防长霉菌，可使溶液长期保存），转入1000mL容量瓶中，用水定容。此溶液为50 mg/L P标准溶液。
准确吸取此贮备溶液25。00mL，稀释至250mL，即为5 mg/L P标准溶液（此稀溶液不宜久存）。
7。2。1。15 K贮备液[（K）＝100mg/L]：准确称取氯化钾KCl，105~110℃干燥2h，分析纯）01907g，溶于去离子水中，定容至1000 mL，摇匀后待用。
7。2。2 仪器
7。2。2。1 分光光度计。
7。2。2。2 火焰光度计。
7。2。2。3 恒温振荡机（温度控制25±℃）。
7。
2。2。4 原子吸收分光光度计。
7。3 浸提步骤
用量样器量取5。00 mL风干土壤（过2mm尼龙筛），同时称量并记录其质量，于100mL塑料瓶中，加入50。0mL M3浸提剂，盖严后于往复振荡机（振荡强度为180r/min）上振荡5 min。
然后用干滤纸过滤，收集滤液于50mL塑料瓶中。整个浸提过程应在恒温条件下进行，温度控制在25±1℃。
另一种方法是：选用搅拌方法代替振荡提的方法：用量样器量取5。00mL风干土壤（过2mm尼龙筛），同时称量并记录其质量，用加液器加入50。
0mL M3浸提剂，用搅拌器搅拌5 min。然后用干滤纸过滤，收集滤液于50mL塑料瓶中。整个浸提过程应在恒温条件下进行，温度控制在25±1℃。
7。4 浸出液中有效养分的定量
7。4。1 M3有效磷的测定
准确吸取2。
00~10。00mL土壤浸出液（依肥力水平而异）于50mL容量瓶中，加水至约
30mL，加入5。00mL钼锑抗试剂显色，定容摇匀。显色30 min后，在880nm处比色。如冬季气温较低时，注意保持显色时温度在150C以上，最好在恒温室内湿色，以加快显色速度。
测定的同时做空白校正。
工作曲线：准确吸取5mg/L P标准溶液0、1。00、2。00、 4。00 、6。00 、8。00mL，分别放入50 mL容量瓶中，加水至约30 mL，加入5。00 mL钼锑抗试剂显色，定容摇匀。显色30min后，在880nm处比出色。
结果计算：
土壤M3-P，mg/L（或mg/kg）=[ρ（P）×V×D]/ [V0或（M）]
式中：
ρ——待测液中P浓度，μg/mL；
V——显色液体积，50mL；
D——分取倍数，浸出液体积/吸取滤液体积；
V0（或M）——土样体积，mL或土样质量，g。
7。4。2 M3速效钾的测定
M3浸出液中钾可直接用火焰光度计测定。
工作曲线：准确吸取100 mg/L K标准贮备液0、1。00、2。50、5。00、10。00、15。00、20。
00mL,分别放入50 mL容量瓶中，用M3浸提剂定容，摇匀，即得0、2。00、5。00、10。00、20。00、30。00、40。00μg/mL K标准系列溶液。
结果计算：
土壤M3-K，mg/L（或mg/kg）=[ρ(K)×V]/[V0(或M)]
式中：ρ(K)——待测液中K浓度，μg/mL；
V——浸提剂体积，mL;
V0（或M）——土样体积，mL或土样质量，g。
7。5 注释
7。5。1 为了避免F—以CaF2形态沉淀的再吸附，应将浸提液剂的 pH控制在2。9 以下。配制Mehlich3浸提剂时应尽量准确，这样可不必每次都测定pH。因为溶液中的F容易对玻璃电极或复合电极造成损坏。
7。5。2 玻璃皿不会造成污染，但橡皮塞尤期是新塞子会严重引起Zn的污染，建议最好使用塑料瓶盛试液。如果同时测定大量与微量元素，玻、塑器皿最好事先在0。2% A1Cl3 •6H2O
或8%~10% HC1溶液中浸泡过夜,洗净后备用,以防微量元素的污染。
7。5。3 M3法的土壤浸出液常带颜色，有粉红色、淡黄色或橙黄色，深浅不一，因土而异。粉红色可能与Mn含量高或浸提出的某些有机物有关，黄色可能与Fe含量高或有机物质有关。溶液颜色可加入活性C脱色，但会对Zn造成污染，故以不加活性C为宜。
7。5。4 注意浸提温度的控制。冬季气温较低时，可采取一些保温措施。
7。5。5 比色液中NH4 和EDTA浓度时对P比色均有干扰，NH4 多时生成蓝色沉淀，EDTA多时不显色或生成白色沉淀（EDTA酸）。
试验表时，在一般钼锑搞比色法的条件下NH4 不得大于0。01 mol/L)。
7。5。6 研究发现,若在工作曲线中分别加入一定量的M3浸提剂,显色后很快会在较高P浓度的各地出现沉淀,从而影响测定结果的准确性。故选用空白校正的方法消答试剂的误差,即:根据未知样品所吸取浸出的体积,相应地做空白测定(不加显色剂),再从未知样品的结果中扣除空白值。
7。5。7 若浸出液中钾的浓度超出测定范围，应用M3浸提剂稀释后再测定。
7。5。8 使用AAS法测定有效Ca, Mg时，浸出液需要用M3浸提剂适当稀释1~20倍后方可测定，可根据具体情况确定稀释倍数。
7。5。9 如果条件具备，可直接用电感耦合等离子发射光谱仪（ICP—AES）进行测定，而不需要稀释；而且在同一浸出液中可同时测定P、K、Na、Ca、Mg、Fe、 Mn、CU、Zn、B等多种元素。
7。
5。10 使用AAS法测定有效微量元素Fe、Mn、CU、Zn时，浸出液需要M3浸提剂适当稀释后方可测定。一般测Fe时，可稀释1~10倍；测Mn时，可稀释2~10倍；测CU、Zn一般不需要稀释。可根据具体情况确定稀释倍数。
都告诉你了，自己找。